Почему этот проект важен?

В последние годы в России, как и во всем мире, увеличилась частота развития инвазивных грибковых инфекций (ИГИ), вызванных условно-патогенными микроскопическими грибами, в первую очередь, у пациентов с онкогематологическими заболеваниями и иммунодефицитными состояниями. Несмотря на возрастающие возможности современных методов профилактики, диагностики и лечения, инвазивные грибковые инфекции (ИГИ) по-прежнему являются значимой причиной в структуре инфекционной заболеваемости и смертности иммунокомпрометированных пациентов детского возраста. Возбудителями ИГИ чаще всего являются дрожжевые грибы рода Candida и плесневые грибы рода Aspergillus, однако последние два десятилетия отмечается увеличение частоты развития редких инвазивных микозов, вызванных условно-патогенными видами грибов, такими как Mucormycetes, Fusarium и др.

На сегодняшний день известно более чем 500 условно-патогенных видах из отделов Ascomycota, Zygomycota, Basidiomycota. В настоящее время золотым стандартом диагностики ИГИ являются микробиологические и для некоторых видов - серологические методы. Однако эффективность культуральных методов диагностики не слишком высокая и составляет от 10 до 50%, в связи с чем большое количество ИГИ остаются неподтвержденными.

Для повышения результативности микробиологической диагностики ИГИ дополнительно необходимо применять иммунофлюоресцентную микроскопию с калькофлуором белым (КФБ), который связывается с клеточной стенкой грибного мицелия, благодаря чему мицелий хорошо визуализируется в ультрафиолетовом длинноволновом свечении. Значимым преимуществом микроскопии с КФБ является универсальность и скорость проведения методики, позволяющая выявлять и дифференцировать клинически значимые грибы, в первую очередь родов Aspergillus и Mucorales, практически в любом биоматериале в течение 60 минут.

В реальной клинической практике, несмотря на проведение микологической диагностики в полном объеме, гематологи/онкологи нередко выявляют отрицательные результаты исследований у пациентов с подозрением или даже клиникой ИГИ. Поэтому во всем мире ведется поиск наиболее оптимальных алгоритмов диагностики ИГИ и идентификации патогенов, в том числе с использованием молекулярных методов исследований Молекулярные методы диагностики ИГИ имеют большой потенциал, однако готовых коммерческих тест-систем по идентификации плесневых грибов для клинического применения в РФ нет. В НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева были разработаны методики, основанные на изучении нуклеотидных последовательностей возбудителей (полимеразная цепная реакция (ПЦР), ПЦР в сочетании с секвенированием) в соответствии с опубликованными на официальном сайте Американского Агентства по защите окружающей среды (US Environmental Protection Agency (EPA)) праймерами. Данные подходы используются нами для диагностики ИГИ у пациентов с клиническими признаками грибковой инфекции и отрицательными результатами микробиологических и серологических исследований, либо при микроскопическом выявлении структуры мицелия и отсутствии культуры гриба для последующей идентификации возбудителя ИГИ. Преимущества молекулярных методов диагностики заключаются в высокой чувствительности и быстроте получения результатов, что необходимо для своевременного назначения пациентам целенаправленной терапии.


Цель проекта

Улучшить раннюю диагностику инвазивных грибковых инфекций и, как следствие, общую выживаемость иммунокомпрометированных пациентов детского возраста за счет создания диагностического алгоритма с применением современных молекулярно-генетических методов.


Что мы хотим сделать?

• -­ Усовершенствовать методику проведения иммунофлюоресцентной микроскопии с окраской КФБ за счет увеличения объема диагностических исследований и внедрения автоматизированной программы самонаведения и пространственного высокоточного сканирования.
• -­ Разработать молекулярные методы диагностики ИГИ (ПЦР, секвенирование по Сенгеру).
• -­ Оценить роль инвазивных и неинвазивных методов диагностики ИГИ у иммунокомпрометированных детей
• -­ При успешной валидации данных и получении высокоспецифичных результатов - разработать алгоритм сверхранней неинвазивной диагностики ИГИ у пациентов группы высокого риска развития инвазивных микозов – на раннем этапе клинических проявлений.

Длительность проекта: 09.2023–12.2024 гг.

---